Diabetologia：激活但功能损坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现呼吸道自身突变到显现1型式高血压临床研究副作用的困难重重率在儿童时期就有更好的所述，多个呼吸道自身突变中会性的儿童中会有70%在血清匹配后10短期内入院高血压，而随访15年的儿童这一人口比例减小到84%。即便如此，占多数临床研究1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的复发机制还没有人获得充分的数据分析法则。

越来越多的人开始采用分期种系统来定义1型式高血压的困难重重：幼体在显现多种呼吸道自身突变时带入第1前，显现体温诱发时带入第2前，显现副作用时带入第3前。一些多发呼吸道自身突变中会性的幼体，在1期和2期，困难重重较快，并发展为复发的1型式高血压。我们前所述了四第一组在首次样品到多种呼吸道自身突变试样后至不及10年无高血压的却是快困难重重者，这第一组病人数量不及，但相似性非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗原抗原CD8+T细胞会反应会在困难重重缓快的病人中会基本不存在，但在近期复发和经常性存在的高血压病人中会很容易样品到。这显然说明了，与困难重重病人相对，这些病人自身免疫反应会的调节减弱。

早期数据分析法则说明了，尽管调节性T细胞会(Treg)数量短时间，但高血压病人存在一些机能缺失，其中会除此以外对IL-2的反应会潜能减小。此外，高血压病人中会的现象CD4+T细胞会显然对调节更具抵抗性，表现为现象T细胞会的减缓减弱，自然产生的Treg和体外产生的减缓Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞会中会IL-2反应会减弱。本数据分析法则的借此是所述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在领头却是缓快困难重重者中会的相似性，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX数据分析法则是一项以人群结合的纵向数据分析法则，在21岁下述胃癌的病人亲属中会体检1型式高血压的危险因素。我们前所述了经常性缓快困难重重者的相似性，他们保持一致多重呼吸道自身突变中会性将近10年，但没有人显现高血压的临床研究副作用，快性或非来外阴自身免疫。随后，10名此后保持一致无高血压并愿意缺少大量血液循环试样的缓快困难重重者纳入T和B细胞会机能分析法则。在目前的数据分析法则中会，8名快困难重重者(SP第一组)，中会位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的呼吸道自身突变中会性。所有的发起者都东南面1型式高血压困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身突变对某些抗原的中会性反应会，然而，一名病人仍然东南面2期至不及6年，但没有人显现临床研究副作用，一名病人被临床为高血压，该受试者72岁，在热带植物实验者试样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析法则中会对该遗传物质来进行了实际上分析法则报告。除去外周血单个氢细胞会(PBMCs)，采用多给定流式细胞会心法和T细胞会减缓试验分析法则报告遗传物质中会Treg的kHz、表现型式和机能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类险恶研究、表征和回归)来进行无监督聚类分析法则，分析法则报告Treg表现型式。

结果：与肥胖症遗传物质相对，来自快困难重重体的失忆CD4+T细胞会的监督聚类标示出，激活着的失忆CD4+ TregkHz减小，与糖皮质激素减缓的TNFR相关蛋白(GITR)理解减小有关。一名HbA1c增高的病人与困难重重缓快者和匹配的实验者第一组相对，Treg谱各有相异。机能分析法则说明了，与肥胖症遗传物质相对，来自缓快困难重重体的Treg介导的CD4+现象T细胞会减缓轻微受损。表现为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134理解的减缓减小。

布1 险恶的表现型式分析法则标示出，CD4+Treg冠状病毒式在快困难重重配置文件中会减小。由FlowSOM作用于的Treg室，围住在来自所有遗传物质的活着CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物理解险恶研究显露10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)采用9个相异Treg标示作用于的10个元簇的MST。每个键值都有一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值第一组周围上色。每个键值中会的饼布回应单个标示的理解级别。(b)每个元聚类的热布，以标示出整体标示理解。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)作用于布，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对之下丰度为每个metacluster装入该线布(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第一组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。深浅蓝色边框都有这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推小写字母秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的分析表明式推测，TregkHz的减小是困难重重缓快的标志。国际标准介导(a - f)和柑桔分析法则(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都有性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR理解来进行除去，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(白斑)第一组以及遗传物质SP 606(深浅蓝色)中会CD25+ cd127的kHz综合布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导侄集的装入该线布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解高强度着色，箭头突显露的簇被鉴别为SP和HD配置文件两者之间的相异。(j)装入该线布标示出了在SP(白斑)和HD(灰点)第一组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对之下丰度(人口比例)。(k)直方布标示出每个簇的表现型式(粉红色)和Treg标示相对之下理解与时代背景理解(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面正要，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中会标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推小写字母秩检验

布3 与肥胖症献血者相对，困难重重缓快者失忆treg的GITR减小。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解标示的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的理解热布(sp606不除此以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)的FlowSOM GITR理解串连，标示出直方布(c)和综合布(d)。Wilcoxon类推小写字母秩和检验，p< 0.07(深浅蓝色)所有遗传物质除此以外，p< 0.05(浅蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不除此以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从国际标准介导，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)串连，标示出直方布(e)和综合布(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推小写字母秩检验

布4 来自缓快困难重重的CD4+ treg细胞会控制现象CD4+T细胞会的潜能减小。SP第一组用浅蓝色的该线和边框回应，HD第一组用白色的该线和边框回应，深浅蓝色的该线/边框回应遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标示为CFSE, Treg按观察的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠激活着细胞会，培养显露来3天后来进行流式细胞会心法样品。(a-d)与CD4+此番者相对之下应的treg培养显露来(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养显露来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE减缓百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百份。采用中会性对照(激活着的响应细胞会不含treg)算出减缓百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象CD4+T细胞会对缓快困难重重的T细胞会激活着的减缓更引人注意。SP第一组用浅蓝色的该线和边框回应，HD第一组用白色的该线和边框回应，深浅蓝色的该线/边框回应遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示，treg按观察的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠激活着细胞会，培养显露来3天后来进行流式细胞会心法(CD25反染)和细胞会因侄分析法则。HD Treg与HD、SP或sp606此番者合作培养显露来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE减缓调升(b)。(c,d) CD25减缓调升(c)和CD134减缓调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养显露来中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显露的结论是，来自缓快困难重重侄的激活着失忆CD4+Treg在GITR理解中会获得了扩展和丰富，务实了有利于数据分析法则Treg在1型式高血压风险幼体中会的表型的必要性。

书名显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28