Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展到

从第一次显现显露来家兔自身特异性到显现显露来1型式心血管疾病外科患者的成效部将在学龄前时期就有很差的所述，多个家兔自身特异性阳性的学龄前中会有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的学龄前这一人口比例上升到84%。相对之下，分之二外科1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的病症组态还从未想得到确实的分析。

更加多的人开始常用已确定系统设计来定义1型式心血管疾病的成效：个基底在显现显露来多种家兔自身特异性时转入第1阶段性，显现显露来血糖精神状态时转入第2阶段性，显现显露来患者时转入第3阶段性。一些多发家兔自身特异性阳性的个基底，在1期和2期，成效较慢，并蓬勃发展为病症的1型式心血管疾病。我们以前所述了一第一组在首次测定到多种家兔自身特异性比对后仅仅10年无心血管疾病的很慢成效者，这第一组病人000人少，但外观上并不明确。随后，我们注意到家兔自身抗原特异性CD8+T细胞会底物在成效尤其慢的病人中会基本不值得注意，但在近期病症和长期值得注意的心血管疾病病人中会很容易测定到。这可能表明，与成效病人相对，这些病人胃溃疡底物的调节增强。

早期分析表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量较长时间，但心血管疾病病人值得注意一些基本功能不足之处，其中会之外对IL-2的底物能力提高。此外，心血管疾病病人中会的畸变以CD4+T细胞会可能对调节更具抵抗性，展现为畸变以T细胞会的抑制作用逼近，自然消除的Treg和基底外消除的作用于Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞会中会IL-2底物逼近。本分析的目的是所述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在群集近乎尤其慢成效者中会的外观上，他们的平均同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以一些人为基础的纵向分析，在21岁表列显露确诊的病人亲族中会检查1型式心血管疾病的危险因素。我们以前所述了长期尤其慢成效者的外观上，他们保持多重家兔自身特异性阳性超过10年，但从未显现显露来心血管疾病的外科患者，慢性或非完成性胃溃疡。随后，10名独自保持无心血管疾病并不愿发放大量血液比对的尤其慢成效者不属于T和B细胞会基本功能比对。在现有的分析中会，8名慢成效者(SP第一组)，中会位同期43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性阳性。所有的自发性都处于1型式心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身特异性对某些抗原的阳性底物，然而，一名病人早就处于2期仅仅6年，但从未显现显露来外科患者，一名病人被诊断为心血管疾病，该人会72岁，在采集实验比对时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中会对该NAD完成了单独评氢。分离外周血单个氢细胞会(PBMCs)，采用多给定流式细胞会术和T细胞会抑制作用试验评氢NAD中会Treg的基频、基因型式和基本功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和复归)完成无指导聚类比对，评氢Treg基因型式。

结果：与肥胖NAD相对，来自慢成效基底的遗忘CD4+T细胞会的指导聚类推测，抑制的遗忘CD4+ Treg基频上升，与利尿剂作用于的TNFR系统性亚基(GITR)理解上升有关。一名HbA1c上升时的病人与成效尤其慢者和归一化的对照第一组相对，Treg磬不尽相同。基本功能比对表明，与肥胖NAD相对，来自尤其慢成效基底的Treg介导的CD4+畸变以T细胞会抑制作用明显受损。展现为对畸变以CD4+T细胞会CD25和CD134理解的抑制作用上升。

三幅1 深入的基因型式比对推测，CD4+Treg非典型式在慢成效描述符中会上升。由FlowSOM聚合的Treg三楼，围住在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物理解检验显露10个元簇:遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;内氢Treg_1;内氢Treg_2;内氢Treg_3;和内氢Treg_4。(a)常用9个并不相同Treg记号聚合的10个元簇的MST。每个数据流代表者一个炮兵部队(100个炮兵部队)，很大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流第一组外面上色。每个数据流中会的饼三幅对此单个记号的理解高至。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整基底记号理解。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)聚合三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的表层。(e-l)相对之下核素为每个metacluster箱3](核素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:内氢Treg_2 (e),内氢Treg_3 (f),内氢Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞会(l)。白色橘色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预报式证实，Treg基频的上升是成效尤其慢的标志。评定离子通道(a - f)和橄榄比对(g-k)尤其SP自发性和归一化的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个基底的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解完成分离，模拟FlowSOM个基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)第一组以及NADSP 606(白色)中会CD25+ cd127的基频汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道叔父集的箱3];(c) HLA-DRloGITR−(内氢Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内氢Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内氢Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内氢T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度纹理，圆点突显露的簇被标记为SP和HD描述符之间的并不相同。(j)箱3]推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一组中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对之下核素(人口比例)。(k)直方三幅推测每个簇的基因型式(黑色)和Treg记号相对之下理解与文化背景理解(白色);上列，内氢Treg_3;下面一行，内氢Treg_4。文化背景与所有其他簇中会记号的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

三幅3 与肥胖献血者相对，成效尤其慢者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T细胞会元簇(遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;内氢Treg_2;内氢Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个理解记号的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的理解热三幅(sp606不之外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR理解串联，推测直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(白色)所有NAD之外，p< 0.05(白色)NADSP 606和归一化的HD不之外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从评定离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)串联，推测直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

三幅4 来自尤其慢成效的CD4+ treg细胞会管控畸变以CD4+T细胞会的能力提高。SP第一组用白色的终点站和橘色对此，HD第一组用黑色的终点站和橘色对此，白色的终点站/橘色对此NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠抑制细胞会，培训3翌日完成流式细胞会术测定。(a-d)与CD4+；也者相对之下应以的treg培训(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。常用阳性对照(抑制的自发细胞会下同treg)算显露抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

三幅5 畸变以CD4+T细胞会对尤其慢成效的T细胞会抑制的抑制作用更敏感。SP第一组用白色的终点站和橘色对此，HD第一组用黑色的终点站和橘色对此，白色的终点站/橘色对此NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按捕捉到的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠抑制细胞会，培训3翌日完成流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因叔父比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用花红(b)。(c,d) CD25抑制作用花红(c)和CD134抑制作用花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

得出结论：我们得显露的得出结论是，来自尤其慢成效叔父的抑制遗忘CD4+Treg在GITR理解中会想得到了扩张和丰富，忽略了全面性分析Treg在1型式心血管疾病风险个基底中会的异质性的必要。

译文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28